Apa tujuan menggunakan ddNTP?
Apa tujuan menggunakan ddNTP?

Video: Apa tujuan menggunakan ddNTP?

Video: Apa tujuan menggunakan ddNTP?
Video: Научно-популярная лекция "Методы секвенирования ДНК" Зубарицкого А.В. ФИЦ Биотехнологии РАН 2024, November
Anonim

DdNTP mengacu pada Dideoksinukleotida trifosfat yang digunakan dalam metode dideoksi Sanger untuk menghasilkan panjang untai DNA yang berbeda untuk sekuensing DNA. Hal ini mengakibatkan penghentian proses polimerisasi DNA (atau pemanjangan DNA) karena proses ini membutuhkan gugus 3'-OH untuk melanjutkan.

Oleh karena itu, mengapa ddNTP digunakan dalam pengurutan?

Dideoksinukleotida adalah inhibitor pemanjangan rantai DNA polimerase, digunakan dalam metode Sanger untuk DNA pengurutan . Dideoksiribonukleotida tidak memiliki gugus hidroksil 3', maka tidak ada pemanjangan rantai lebih lanjut yang dapat terjadi setelah dideoksinukleotida ini berada pada rantai. Ini dapat menyebabkan penghentian DNA urutan.

Demikian pula, apakah ddNTP menempel pada dNTP? Satu atau lebih dari dNTP diberi label radioaktif untuk membantu memvisualisasikan produk replikasi. Akhirnya, setiap tabung mendapat satu dari empat nukleotida khusus yang disebut dideoksinukleotida ( ddNTPs ). Namun, setelah dimasukkan, DNA polimerase tidak dapat memperpanjang rantai lebih lanjut karena membutuhkan 3'-OH untuk menempel ke nukleotida berikutnya.

Demikian pula orang mungkin bertanya, bagaimana ddNTP menghentikan reaksi pengurutan?

Ketika hadir dalam jumlah kecil di reaksi pengurutan , dideoksiribonukleosida trifosfat ( ddNTPs ) mengakhiri reaksi pengurutan pada posisi yang berbeda dalam untai DNA yang sedang tumbuh. ddNTP menghentikan reaksi pengurutan karena mereka: menyebabkan DNA polimerase jatuh dari untai cetakan. C.

Teknik apa yang melibatkan Dideoksinukleotida yang dapat digunakan?

Urutan Sanger adalah metode pengurutan DNA berdasarkan penggabungan selektif pemutusan rantai dideoksinukleotida oleh DNA polimerase selama replikasi DNA in vitro. Dikembangkan oleh Frederick Sanger dan rekan-rekannya pada tahun 1977, ini adalah yang paling luas digunakan pengurutan metode selama kurang lebih 40 tahun.

Direkomendasikan: