Daftar Isi:

Mengapa produk PCR perlu dimurnikan sebelum diurutkan?
Mengapa produk PCR perlu dimurnikan sebelum diurutkan?

Video: Mengapa produk PCR perlu dimurnikan sebelum diurutkan?

Video: Mengapa produk PCR perlu dimurnikan sebelum diurutkan?
Video: Не делайте это перед ПЦР-тестом! 2024, November
Anonim

Verifikasi yang diinginkan produk adalah penting , yang mencakup konfirmasi kurangnya non-spesifik produk dan dimer primer. Membersihkan -up dari campuran reaksi juga diperlukan untuk menghilangkan primer dan dNTP yang tidak tergabung yang dapat mengganggu reaksi selanjutnya dan menyebabkan urutan yang tidak dapat dibaca.

Selain itu, mengapa produk PCR perlu dimurnikan?

Kamu butuh memurnikan produk PCR menyingkirkan primer, nukleotida, dan enzim yang tidak terpakai untuk mengoptimalkan keberhasilan ligasi, yang akan mempertahankan dan mengurutkan produk dari PCR . Ke memurnikan NS produk PCR , kromatografi eksklusi ukuran digunakan.

Orang mungkin juga bertanya, haruskah Anda memurnikan produk PCR sebelum pencernaan restriksi endonuklease? Sebagian besar dari larangan enzim aktif dalam PCR buffer. Untuk aplikasi kloning, pemurnian dari Produk PCR sebelum dicerna adalah diperlukan untuk menghilangkan polimerase DNA termofilik aktif yang ada di PCR campuran. DNA polimerase dapat mengubah ujung DNA yang dibelah dan mengurangi hasil ligasi.

Orang juga bertanya, bagaimana Anda mempersiapkan produk PCR untuk sequencing?

Urutan Langsung Produk PCR

  1. Pastikan Anda memperkuat fragmen yang tepat.
  2. Anda harus menghapus semua sisa primer PCR dan nukleotida yang tidak tergabung.
  3. Jika primer PCR juga akan menjadi primer sequencing, pastikan mereka cocok dengan kondisi kita.
  4. Jangan terlalu berkonsentrasi pada sampel!

Bisakah Anda mengurutkan produk PCR?

Langsung Pengurutan dari Produk PCR . Pengurutan hanya menggunakan satu primer alih-alih dua yang digunakan dalam PCR . Jika kamu melakukan tidak menghapus kedua primer, kamu akan dapatkan dua urutan ditumpangkan satu sama lain yang tidak dapat dibaca. Tidak apa-apa untuk menggunakan PCR primer untuk pengurutan selama itu sesuai dengan kondisi kita.

Direkomendasikan: