Daftar Isi:

Bagaimana Anda memilih klon?
Bagaimana Anda memilih klon?

Video: Bagaimana Anda memilih klon?

Video: Bagaimana Anda memilih klon?
Video: Каминоанцы - Армия клонов - Возрожденный Император (ПОЛНАЯ ИСТОРИЯ клонов) 2024, November
Anonim

Kapan memilih A klon , pastikan akarnya kuat, putih dan menonjol keluar dari media tanam. Jika akarnya berwarna coklat dan layu, atau tampak tidak aktif, letakkan kembali dan cari yang lebih baik.

Selain itu, bagaimana Anda mengkloning satu sel?

  1. Hitung sel untuk memasukkan ~16.000 sel ke dalam sumur pertama (A1) dari pelat 96-sumur yang berisi 200 L medium.
  2. Keluarkan 100 L dari sel yang mengandung A1 dan campur dengan B1, pipet ke atas dan ke bawah 3x agar tercampur rata sebelum mengeluarkan 100 L dan campur dengan C1, dst.

Juga, bagaimana Anda memilih koloni sel mamalia? Tempatkan piring di bawah mikroskop untuk memilih sehat yang tidak terdiferensiasi koloni . Pilih koloni menggunakan pipet P-20 set ke 10ul. Dengan hati-hati memilih A koloni tanpa putus koloni menjadi tunggal sel , dan pindahkan ke piring 96-sumur dengan tripsin. Pipet ke atas dan ke bawah beberapa kali untuk membubarkan koloni.

Sejalan dengan itu, bagaimana Anda menggunakan silinder klon?

Menggunakan forsep medium steril, ambil a silinder kloning . Tekan perlahan bagian bawah yang rata dari silinder ke dalam minyak silikon halus dan lepaskan dengan gerakan vertikal tiba-tiba. Jika dilakukan dengan benar, ini akan memberikan pemerataan minyak di bagian bawah silinder . Mengatur silinder atas sebuah koloni.

Bagaimana Anda memilih koloni untuk garis sel yang stabil?

Protokol untuk menghasilkan garis sel yang stabil memerlukan beberapa langkah seperti yang ditunjukkan di bawah ini:

  1. Menghasilkan kurva membunuh untuk menentukan konsentrasi antibiotik seleksi yang optimal.
  2. Transfeksi sel dengan konstruksi plasmid yang diinginkan
  3. Pilih dan perluas koloni poliklonal yang stabil.
  4. Identifikasi klon tunggal dengan pengenceran dan ekspansi terbatas.

Direkomendasikan: