Apa yang terjadi jika Anda menambahkan terlalu banyak enzim restriksi?
Apa yang terjadi jika Anda menambahkan terlalu banyak enzim restriksi?

Video: Apa yang terjadi jika Anda menambahkan terlalu banyak enzim restriksi?

Video: Apa yang terjadi jika Anda menambahkan terlalu banyak enzim restriksi?
Video: #Rekayasa Genetika - enzim restriksi 2024, November
Anonim

Pencernaan yang tidak sempurna dapat terjadi ketika terlalu banyak atau juga kecil enzim digunakan. NS adanya kontaminan dalam NS sampel DNA bisa menghalangi enzim , juga mengakibatkan pencernaan yang tidak lengkap. Beberapa enzim restriksi membutuhkan kofaktor untuk aktivitas penuh.

Selain itu, mengapa enzim restriksi ditambahkan terakhir?

NS enzim restriksi biasanya adalah terakhir komponen ditambahkan reaksi untuk memastikan bahwa itu tidak terkena kondisi ekstrim. Reaksi rakitan harus dicampur setelah enzim tambahan. Campur semua larutan yang mengandung enzim restriksi dengan lembut untuk menghindari enzim inaktivasi.

Selanjutnya, bagaimana pencernaan enzim restriksi dapat ditingkatkan? Gunakan tidak lebih dari yang direkomendasikan enzim jumlah (misalnya, 10 unit enzim per mikrogram DNA). Kurangi jumlah enzim dalam reaksi, jika perlu. Hindari inkubasi berkepanjangan pencernaan reaksi. Gunakan buffer reaksi yang direkomendasikan.

Juga tahu, mengapa enzim restriksi tidak dipotong?

Persiapan DNA yang akan dibelah Sebaiknya bebas dari kontaminan seperti fenol, kloroform, alkohol, EDTA, deterjen, atau garam berlebihan, yang semuanya dapat mengganggu enzim restriksi aktivitas. Jika inhibitor (seringkali garam, EDTA atau fenol) hadir, DNA kontrol akan tidak dipotong setelah pencampuran.

Mengapa jumlah enzim dapat menyebabkan aktivitas bintang?

Aktivitas bintang adalah relaksasi atau perubahan kekhususan pembatasan enzim pembelahan DNA yang dimediasi bisa terjadi di bawah kondisi reaksi yang berbeda secara signifikan dari yang optimal untuk enzim . Aktivitas bintang bisa terjadi karena adanya Mg2+, sebagai adalah terlihat di HindIII, misalnya.

Direkomendasikan: